造血干细胞(精选5篇)

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造血干细胞范文第1篇

一、多能干细胞

多能干细胞是由Till和McCulloch等在60年代初，应用脾集落形成细胞定量法，首先在小鼠体内证明的。他们给经射线照射的小鼠输入同系鼠骨髓细胞，在10～14天后在脾内形成可见的结节，它是由单一骨髓细胞发育分化而成的细胞集落，称之为脾集落形成单位（colony forming unit-spleen’CFU-S）。集落数与输入的细胞数成正比，它可分化发育为红细胞、粒细胞及巨核细胞。CFU-S长期以来用体内集落法进行检测。

在70年代后Johnson和Metcalf等应用鼠胎肝细胞体外培养法，证明具有CFU-S性质的干细胞可在体外培养成功，这是在研究干细胞方法学上的重大改进。

其后，Haral等用小鼠骨髓细胞在甲基纤维素中加入红细胞生成素（erythropoietin’EPO）及脾细胞培养上清，进行体外培养，可形成含有红细胞、巨核细胞以及巨噬细胞的集落，称为混合集落形成单位（CFU-Mix）。其后，小林登等在80年代用人骨髓细胞亦报告CFU-Mix培养成功。即由多能干细胞可进一步分化为定向髓系多能干细胞及淋巴系干细胞。淋巴系干细胞是T和B细胞的共同祖先细胞，但目前尚不能用脾集落实验证明其存在。

二、单能干细胞

单能干细胞是一类具有向特定细胞系分化能力的干细胞，也称为祖细胞（progenitor）。如进行体内移植不能形成脾集落，但在一定造血因子的存在下，可在体外培养并形成细胞集落，称为代表外培养集落，称为体外培养集落形成单位（colony forming unit-culture’CFU-C），因此它与多能干细胞不同，它可包括分化为红细胞的红系干细胞，可分化为粒细胞和单核细胞的粒、单核细胞干细胞系及可分化为血小板的巨核干细胞系。

1．红系干细胞应用骨髓细胞加甲基纤维素在大量EPO存在下，进行体外培养可产生大型红细胞集落，可含有1000个以上的细胞，形成如爆发火花样的集落，称此干细胞为爆式红细胞集落形成细胞（burst unit-erythoid ’BFU-E）。如用小剂量EPO则产生小型集落，由8～50个细胞组成，称此干细胞为红细胞系集落形成细胞（colony forming unit-E’CFU-E）BFU-E是更早期的红系干细胞，而CFU-E则为较晚期的红系干细胞。

造血干细胞范文第2篇

[关键词] 造血干细胞；移植；心理护理；干预

[中图分类号] R687.3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2015）05（c）-0146-03

[Abstract] Objective To discuss the psychological nursing intervention for patients underwent hematopoietic stem cell transplantation so as to provide a reference for clinical nursing in the future. Methods 80 admitted cases underwent hematopoietic stem cell transplantation from January 2013 to December 2014 were selected and randomly divided into two groups， the observation group and the control group with 40 cases in each. The observation group were given the high-quality psychological nursing intervention， and the control group were given the conventional psychological nursing intervention. And the status of psychological nursing intervention was compared between the two groups. Results After clinical psychological nursing， in the observation group， the SAS scores were （32.7±4.7） points， SDS scores were （34.9±6.3） points， and those in the control group were （56.8±7.8） points， （57.9±6.7） points respectively， the difference between the two groups was statistically significant， P

[Key words] Hematopoietic stem cell； Transplantation； Psychological nursing； Intervention

造血干细胞移植是目前难度较高的治疗血液疾病的方法，并且对治疗实体瘤具有较大的积极意义。随着医疗技术水平的提升，造血干细胞移植的效果也在加强，很多患者都在术后得到了良好的恢复。从主观的角度来说，很多造血干细胞移植患者的心理状态并不好，无论是在术前还是术后，都表现出了突出的压抑情绪，不仅影响到了自身疾病的康复，同时还容易造成病情反复，给自己和家人带来较大的痛苦。严格来讲，积极的心态能够促进造血干细胞移植的成功，且对患者的生理也具有积极意义，可减轻病痛。为此，应对患者实施有效的心理护理干预。在此，该研究在2013年1月―2014年12月期间主要对造血干细胞移植病人的心理护理干预展开探讨，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选择2013年1月―2014年12月收治的80例造血干细胞移植病人为研究对象，随机分为两组，即观察组与对照组，每组患者40例。观察组：男性患者为16例，女性患者为24例；患者年龄在18～43岁之间，平均年龄为（31.5±2.6）岁；其中，急性淋巴细胞白血病患者10例，急性非淋巴细胞白血病16例，骨髓增生异常综合征患者6例，慢性髓性细胞白血病患者8例， 对照组：男性患者为17例，女性患者为23例；患者年龄在19～44岁之间，平均年龄为（31.6±2.7）岁；其中，急性淋巴细胞白血病患者15例，急性非淋巴细胞白血病17例，骨髓增生异常综合征患者3例，慢性髓性细胞白血病患者5例，两组患者在年龄、性别等方面比较差异无统计学意义，具有可比性（P>0.05）。

1.2 方法

观察组患者实施优质心理护理干预，对照组患者实施常规心理护理干预，对比两组患者的心理护理干预情况。

1.2.1 观察组 第一，移植前的护理干预。向病人及其家属详细讲解移植的主要过程，但应注意合并症的讲解应适当[1]。还可请移植后一般状况良好的病人与等待移植的病人沟通，交流移植过程中的感受及预后[2]。带领病人和家属参观病房及层流室，以减轻病人的焦虑和压抑感[3]。同时对层流室内部及病人的可视范围区进行美化、装饰。第二，移植中的护理[4]。强化社会支持，尽可能地保持病人与原生活环境的联系，如请亲朋好友、领导、亲属等经常与层流室内病人通话，予以鼓励，也可与家属商量饮食安排，鼓励病人看电视、听音乐、读书、看报，以分散注意力，减轻孤独感[5]。第三，移植后的护理。教会病人自我医疗保护，认识潜在危险的症状和排异反应的监测方法[6]。定期组织联谊会，让移植后的病人相互交流体会，从中吸取各自所需的应对措施，对战胜面临的和未来的症状有很大帮助[7]。

1.2.2 对照组 第一，给予患者相应的关怀，增加家属的探视时间。第二，对患者进行心理评估，了解患者的心理变化。第三，观察患者的行为反应，给予必要性的心理干预[8]。

1.3 观察指标

在该研究中，主要观察两组患者的心理护理效果、心理健康程度、心理状况的发展。心理护理效果包括SAS评分、SDS评分两项标准；心理健康程度包括疲劳感、习惯、不适应、抑郁等指标；心理状况包括躯体化、强迫、敌对、偏执、人际关系敏感、精神病性压抑等指标。

1.4 统计方法

该研究应用SPSS 17.0统计学软件对得到的数据展开分析；计量资料通过（x±s）表示；相关数据应用t进行检验；以P

2 结果

2.1 护理效果

经过临床心理护理，两组患者的护理效果存在差异。经过相应的统计后发现，观察组患者的心理护理效果明显优于对照组。观察组患者的SAS评分为（32.7±4.7）分，SDS评分为（34.9±6.3）分；对照组患者的SAS评分为（56.8±7.8）分，SDS评分为（57.9±6.7）分，两组患者比较差异有统计学意义（P

2.2 心理健康

为了能够更好的了解两组患者心理护理的情况，该研究对两组患者的心理健康情况进行评分。经过大量的指标比较后发现，观察组患者的心理健康程度高于对照组，证明优质心理护理干预对患者的积极意义较大，两组患者比较差异有统计学意义（P

2.3 心理状况

相对而言，要想更好的了解心理护理是否有效，还应该对患者的心理状况进行调查。为此，该研究对两组患者的心理状况进行分析，两组患者比较差异有统计学意义（P

3 讨论

3.1 造血干细胞移植病人的心理护理分析

相对而言，造血干细胞移植是目前技术非常高的一种手术类型，不仅对患者造成的身体创伤较为严重，同时对患者的心理影响也很大，很多患者在术前或术后，都表现出了严重的负面情绪，即便得到开导，但如果患者自己无法从阴影当中走出来，同样会影响最终的手术效果和康复效果。为此，应对造血干细胞移植病人展开优质心理护理干预。从结果来看，观察组患者的心理状况明显优于对照组，且术后恢复良好，证明优质心理护理干预的效果值得肯定。

经过临床心理护理，观察组患者的心理护理效果明显优于对照组。观察组患者的SAS评分为（32.7±4.7）分，SDS评分为（34.9±6.3）分；对照组患者的SAS评分为（56.8±7.8）分，SDS评分为（57.9±6.7）分，两组患者比较差异有统计学意义（P

3.2 造血干细胞移植病人的心理护理

从客观的角度来分析，心理护理一直都是临床上的重点护理环节。在部分情况下，心理护理的积极作用，甚至要强于生理护理，并且能够对患者产生理想的康复效果。造血干细胞病人的心理护理，应从客观和主观两个方面来展开。经过资料的调查与研究，郭辉、胡艳华、罗杰对造血干细胞病人的术前护理展开研究，证明术前心理护理对患者具有较大的积极意义。另一方面，孙丽敏、黄斌英研究了护理干预对造血干细胞病人治疗依从性的研究，结果证明，心理护理干预能够提高造血干细胞病人治疗依从性，对患者康复的积极意义较大。

从该研究结果来看，观察组患者给予优质心理护理干预后，其各项心理指标明显恢复，未超出正常范围，且积极配合治疗，自身遭受的痛苦较低。为此，在今后的造血干细胞移植病人的心理护理工作中，需积极推广应用优质心理护理干预。第一，需通过各种方式了解患者的负面情绪根源，尽量通过沟通、聊天、玩笑等方式来了解，告别生硬的问卷调查，减少患者的恐惧。第二，为患者制定针对性的心理护理方案，在移植前、移植中、移植后分别执行不同的心理护理，帮助患者理性的看待自身病症，积极的面对生活。第三，考虑到患者在某些情况下，情绪可能会比较激动，因此在向患者阐述病情的过程中，在不违背原则的基础上，应阐述积极的一面，尽量不要让患者太过消极。综上所述，造血干细胞移植病人的心理护理非常重要，日后应引起重视，必须采取有效的手段，才能提高患者的康复水平。

[参考文献]

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[4] 姚云.外周造血干细胞移植病人的心理干预[J].医学信息，2011，3（4上旬刊）：1728.

[5] 王洪梅，管伟，刘爱，等.造血干细胞移植病人术前的心理护理[J].护理研究，2011（6）：1672-1673.

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[8] 邵琰，周兰月，周芳.综合护理干预对造血干细胞移植患者口腔黏膜炎影响的研究[J].中国医学装备，2014，11（3）：139-141.

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造血干细胞范文第3篇

【关键词】造血干细胞移植；淋巴瘤；淋巴细胞白血病

EffectofHematopoieticStemCellTransplantationinMalignantHematologicDiseaseofLymphaticSystem

AbstractThestudywasaimedtoinvestigatetheeffectofhematopoieticstemcellstransplantation(HSCT)intreatmentforhematologicmaglignaciesoflymphaticsystem.Throughobserving8patientswithnon-Hodgkin′slymphoma(NHL)and3patientswithlymphoblasticleukemia,whoreceivedautoorallo-HSCTafterchemotheraphy,thehematopoieticreconstitution,complicationandsurviraltimewereevaluated.Theresultsshowedthat11patients(7patientsafterauto-PBSCT,4patientsafterallo-PBSCT)allachievedhematopoieticreconstitutionandcompleteremission(CR).Withinthreeyearsfollowing-up,5patientswithNHLweresurvival,butonecaseofNHLdiedatthe2monthsafterauto-PBSCT,onepatientsuicided.From4casesreceivedallo-PBSCT,onepatiantwithNHL(NKcell)wasdiedat79dayslater,onepatientwithchroniclymphoblasticleukemiawassurviving,another2casesofacutelymphoblasticleukemiaweredeadat17monthsand54daysrespectivelyafterallo-PBSCT.InconclusionHSCTisaneffectivetreatmentforhematologicmaglignanciesoflymphaticsystem,butthereplasewouldoccurinsomepatientsreceivedauto-PBSCT.Theothersbyallo-PBSCTmightdieofseverecomplicationoftransplantation.

Keywordshematopoieticstemcellstransplantation;lymphoma;lymphoblasticleukemia

造血干细胞移植（HSCT）已被公认为是治疗恶性血液病的有效方法，特别是对急慢性白血病及中高度恶性、初治耐药、易于复发等预后不良淋巴瘤效果尤为突出［1］。外周血造血干细胞移植（PBHSCT）是HSCT中的一种类型，因其采集方法简便，移植后造血重建迅速，痛苦相对较少,易于被患者个人或供者接受，而广泛应用于临床治疗。本研究在已有的造血干细胞移植研究基础上［2-7］，重点探讨HSCT治疗淋巴系统恶性血液病的效果。

材料和方法

病种和移植类型

11例移植患者中，男6例，女5例，年龄15-56岁（中位年龄35岁），其中非霍奇金淋巴瘤8例（弥漫性大B细胞型5例，B细胞源性2例，NK细胞型1例），急性淋巴细胞白血病2例，慢性淋巴细胞白血病1例。移植类型：自体外周血干细胞移植7例，异基因HLA单倍相合亲缘移植4例（其中2例为非清髓移植，2例为清髓移植）（表1）。Table1.Informationof11patientswithmalignanthematologicdiseaseoflymphaticsystemafterHSCT（略）

干细胞的采集、动员、保存

对所有异基因造血干细胞供者均予粒细胞集落刺激因子（G-CSF）动员外周血干细胞，10μg/（kg·d）分2次皮下注射共5天，所有自体造血干细胞移植患者先予环磷酰胺（cyclophosphamide，CTX）联合G-CSF动员外周血干细胞，再用CS-3000plus(Baxter公司产品)分离外周血干细胞，每次循环血量10L左右，如1次采集干细胞数量不足，可于第2日重复采集直至CD34细胞数量超过3×106/kg，将采集到的外周血造血干细胞放置液氮中保存。

预处理方案及干细胞回输

自体造血干细胞移植（auto-HSCT)中，有6例采用CBV方案(CTX/VP-16/CCNU)，1例选用MA方案（MIT/Ara-C）进行移植术前预处理。异基因造血干细胞移植（allo-HSCT)中，2例非清髓干细胞移植者，1例采用环磷酰胺阿糖胞苷全身照射（CTX/Ara-C/TBI），1例采用氟达拉滨(fludarabine，FAMP)环磷酰胺进行预处理；2例清髓干细胞移植者，1例采用CTXTBI，1例采用CTX/VP-16/TBI进行术前预处理。所有患者在预处理结束后均予以输注含CD34细胞数平均为5.5×106/kg的未去T细胞的移植物，移植后即开始使用G-CSF（300μg/d），直至WBC＞3×109/L后停用。

结果

造血重建

11例患者中性粒细胞（ANC）＞0.5×109/L平均天数为11（8-18）天，血小板（Plt）＞20×109/L平均天数为12（8-23）天（表2）。Table2.Hematopoieticreconstitution,complicationandprognosisof11patientswithmalignanthematologicdiseaseoflymphaticsystemafterHSCT（略）

并发症

自体造血干细胞移植中，3例患者在骨髓抑制期间出现肛周、口咽部、颈静脉置管处感染，1例在造血功能恢复前因血小板低出现泌尿系出血。异基因造血干细胞移植中，1例出现移植物抗宿主病（GVHD）及肝静脉闭塞病（veno-occlusivediseease，VOD），1例出现移植物抗宿主病及出血性膀胱炎（hemorrhagiccystitis，HC）、间质性肺炎。

近期疗效

8例非霍奇金淋巴瘤患者中，5例为弥漫大B细胞型，2例为B细胞源性，1例为NK/T细胞型，移植前5例CR，3例PR，按文献［8］标准，外周血干细胞移植术后8例均为CR；3例淋巴细胞白血病患者中1例为CLLA期，2例为ALL，其中有1例多次复发，移植术后3例均达到CR。

生存期

随访3年，自体移植7例患者中，除1例自杀身亡，1例术后再次复发出现肝脏、中枢神经系统广泛浸润，于移植术后2月死亡外，其余5例均无病生存。异基因移植4例患者中，除1例CLL患者无病生存外，其余3例分别于移植后54天、2个月、17个月死亡。

讨论

上述7例auto-HSCT患者均为非霍奇金淋巴瘤弥漫大B细胞型或B细胞型，已有报道明确表明，放（化）疗大约可使30%的NHL病人长期存活，但对于中、高度恶性NHL病人的长期生存改善不明显，auto-PBSCT已成为中、高度恶性非霍奇金淋巴瘤病人治疗的标准方案之一［9］。对于初治未达到CR的侵袭性NHL病人，常规挽救治疗的效果比较差，长期无病生存率很低，而auto-PBSCT却能获得较高的CR率和PR率，5年生存率达37%［10］。我院所采用auto-PBSCT治疗的7例患者中，有3例为初治未达到CR的淋巴瘤，5例为中度恶性淋巴瘤，经过auto-PBSCT后7例均达到CR标准，其中1例弥漫大B细胞型患者移植前经CHOP方案、proMACE-cytoBOM方案、MACOP-B方案多次化疗后均不能缓解，行auto-PBSCT治疗后复查各项指标提示达到CR标准,但2月后再次复发，出现肝脏及中枢神经系统广泛侵润最终导致死亡。因此可以说，自体干细胞移植无供受者之间的免疫排斥，合并症少，造血重建快，既使出现骨髓抑制引发的感染、出血、贫血症状，予以细胞因子刺激造血，同时加强抗感染、输红细胞悬液、血小板及对症处理后也可迅速恢复，确实是治疗中高度恶性、初治耐药难治性恶性淋巴瘤的有效方法，但同时也要看到因为自体干细胞移植缺乏GVL效应，易于在移植之后再次复发，降低了auto-PBSCT对该类疾病的总体有效率。鉴于auto-HSCT治疗NHL有一定的复发率，且国际上也存在采用异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）治疗侵袭性淋巴瘤的病例，遂予例8患者进行了非清髓allo-HSCT治疗，移植过程中患者造血重建恢复迅速，也未出现严重GVHD及其他相关移植并发症，可能与术中有效使用环孢素（CsA）、骁悉（MMF）进行移植物抗宿主病预防有关，但移植后患者再次复发，较术前有明显进展，出现颅内及脾脏多处浸润。有研究表明，对侵袭性淋巴瘤的治疗，可考虑采用allo-HSCT取代auto-HSCT,但采用allo-HSCT仍有25%复发率，且移植相关死亡率较高，使其总体生存率（OS）仅有18%-35%［11，12］，近年来有报道显示采用allo-HSCT治疗恶性淋巴瘤OS可升至76%［13］，所以allo-HSCT对NHL具有治愈潜能，但因其高移植相关死亡率，同时也存在移植后复发可能，因此需有选择地对该类患者进行allo-HSCT。目前，allo-HSCT在治疗急性白血病方面已得到公认。在上述11例患者中，有2例ALL患者进行了清髓allo-HSCT，分别采用CTXTBI、CTXVP16TBI作为预处理方案。例6患者造血重建略有延迟，例7造血重建迅速，分别出现Ⅱ度aGVHD和Ⅲ度aGVHD,移植后2例患者均完全缓解，但例7因同时存在出血性膀胱炎及巨细胞病毒感染导致的间质性肺炎于移植后第54天死亡，例6因广泛性cGVHD在移植17个月后死亡。虽然allo-HSCT治疗急性白血病效果已得到肯定，但上述2例患者无病生存时间较短可能与预处理强度、配型为单倍相合及严重移植相关并发症有关。此外，allo-HSCT在CLL中的应用也逐渐被重视起来。Pavletic等［14］报道了用allo-HSCT治疗23例CLL的情况，结果显示在这些移植后患者中完全缓解率达到87%，5年的无病生存率仅为65%，复发率为5%。虽然本研究中仅有1例为采用非清髓allo-HSCT治疗的CLL患者，但其移植后亦达到完全缓解并且无病生存。综上所述，虽然自体造血干细胞移植患者尚存在复发的可能，异基因造血干细胞移植患者有一定的移植相关死亡率，但造血干细胞移植仍然是治疗恶性淋巴系统血液疾病的一个有效方法，值得在临床工作中推广。

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3陈宝安，张琰，丁家华等.非清髓造血干细胞移植后致敏供者淋巴细胞输注对嵌合状态及GVHD影响的实验研究.中国实验血液学杂志，2006；14：102-106

4陈宝安，毕延智，丁家华等.非清髓性骨髓移植诱导异基因受者小鼠免疫耐受的实验研究.中国实验血液学杂志，2005；13：1054-1057

5丁家华，陈宝安，孙雪梅等.非清髓性外周血造血干细胞移植治疗慢性粒细胞白血病慢性期及加速期的疗效观察.临床血液学杂志，2005；18：292-294

6丁家华，陈宝安，董伟民等.非清髓外周血造血干细胞移植治疗慢性粒细胞白血病.白血病·淋巴瘤，2004；13：136-138

7陈宝安，熊辉霞，丁家华等.非清髓异基因外周造血干细胞移植治疗难治性恶性血液病.临床肿瘤学杂志，2005；10：14-17

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9Gutierrez-DekgadoF，MaloneyDG，PressowOW，etal.Autologousstemcelltrasplantationfornon-Hodgkin′slymphoma:comparisonofrediation-basedandchemotherapy-onlypreparativeregimens.BoneMarrowTransplant,2001；28;455-461

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12MitterbauerM,NeumeisterP,KalhP,etal.Long-termclinicalandmolecularremissionafterallogeneicstemcelltransplantation(SCT)inpatientswithpoorprognosisnon-Hodgkin′slymphoma.Leukemia,2001；15:635-641

造血干细胞范文第4篇

作者：王玲 史春雷 李颖 袁成录

【摘要】 目的 探讨恶性血液病自体造血干细胞移植后应用树突状细胞细胞因子诱导的杀伤细胞（DCCIK）预防复发的效果。方法 12例恶性血液病病人自体造血干细胞移植后静脉输注及腹股沟注射DCCIK 细胞2～3次，观察疾病的复发情况以及DCCIK 细胞输注后的副作用。结果 7例持续完全缓解（CR），中位CR期44（32～56）月。4例死亡，其中3例复发。结论 DCCIK细胞治疗可能有助于清除微小残留病，预防疾病复发，延长病人生存期，且副作用小，临床可以选用DCCIK细胞预防自体造血干细胞移植后恶性血液病的复发。

【关键词】 DCCIK细胞；造血干细胞移植；移植，自体；复发

［ABSTRACT］ Objective To observe the clinical efficacy of dendritic cells in combination with cytokineinduced killer cells (DCCIK) to prevent recurrence of malignant hematopathy after autohematopoietic stem cell transplantation (AutoHSCT).Methods After autoHSCT， 12 patients with malignant hematopathy were treated with DCCIK cells intravenously and intradermally for 2-3 times a week. The recurrence and side effects DCCIK were followed up. Results Complete remission (CR) was found in seven patients， the median CR period was 44 (range 32-56) months， four died， in which， recurrence was note in three patients. Conclusion Treatment with DCCIK cells may be helpful in clearing minimal residual disease， preventing relapse and prolonging the patients’ life with less side effects， which can be used to prevent recurrence of malignant hematopathy after autoHSCT.

［KEY WORDS］ DCCIK cells; hematopoietic stem cell transplantation; transplantation， antologous; recurrence

自体造血干细胞移植是治疗恶性血液病的有效方法之一，自体造血干细胞移植可以将化疗剂量提高到致死量，从而达到减少残留病、降低复发率的作用。但是因为大剂量化疗后仍然存在微小残留病，不能完全解决移植后复发的问题，使得自体造血干细胞移植的应用受到一定限制。国内外采用体内外净化的方法去除移植物中部分残留的肿瘤细胞，但因为造价昂贵、植活时间延长等原因导致净化方法不能广泛应用。我院自2004年8月以来，对12例恶性血液病病人在自体造血干细胞移植后应用自体树突状细胞细胞因子诱导的杀伤细胞(DCCIK)治疗，观察其预防复发的效果以及副作用。现将结果报告如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

12例病人中，男8例，女4例，中位数年龄48（13～56）岁。其中急性白血病4例，分别为急性非淋巴细胞白血病（ALL）2例，急性淋巴细胞白血病2例；非霍奇金淋巴瘤6例;霍奇金淋巴瘤1例；多发性骨髓瘤1例。

1.2 DC和CIK细胞诱导方法

1.2.1 细胞诱导和采集

用IL2(山东泉港药业有限公司生产)100万单位+生理盐水静脉滴注，每天1次，连续诱导5 d。诱导结束后4 d，使用细胞分离单采机采集病人外周血单个核细胞。如果单个核细胞计数低于0.4×109/L，则用GMCSF 150 μg皮下注射，每天1次，连续注射1～3 d，然后再进行细胞采集。

1.2.2 细胞采集

使用细胞分离单采机（SPECTRA 6.0，COBE公司，美国）采集病人外周静脉血6～8 L，每120～150 mL血浆约采集(3～6)×109单个核细胞。

1.2.3 抗原制备方法

根据肿瘤类型选择相同病理类型的人肿瘤细胞株制备抗原，细胞株均购自中国科学院上海生物科学院细胞资源中心。将肿瘤细胞株培养至(1～2)×108个，收集细胞，生理盐水洗涤。将细胞置于RPMI 1640培养液中反复冻融，离心去残渣，上清液过滤备用。

1.2.4 DC和CIK细胞制备

采集的细胞按照常规方法分离并洗涤单个核细胞，调整细胞的密度至1×1010/L，平均加到16只细胞培养瓶（美国BD公司）中，于37 ℃体积分数0.05的CO2培养箱中孵育2 h，使贴壁细胞和悬浮细胞分离。取出悬浮细胞置另外细胞培养瓶中备用。在含有大量贴壁细胞的培养瓶中加入含有20 μg/L IL4、50 μg/L GMCSF的DC无血清培养基（德国CellGenix公司），在37 ℃体积分数0.05的CO2培养箱中孵育，6 d后加入DC培养液和相应的肿瘤抗原继续培养2 d，即为成熟DC，部分回输，其余冻存。悬浮细胞的培养瓶中加入适量RPMI 1640培养液、灭活胎牛血清和IL2、 IFNα、CD3单抗（美国R&D公司）细胞因子等，在37 ℃体积分数0.05的CO2条件下培养。第8天细胞部分静脉回输，余细胞继续培养至15 d。

1.2.5 细胞表型检测和细胞计数

培养结束后，采用流式细胞仪检测DC标志DR和CD83，以CD3为标志来鉴定检测CIK细胞；回输前分别计数DC和CIK细胞。

1.3 治疗方法

自体造血干细胞移植造血恢复后1个月开始回输DC。回输前将DC均分，1份与CIK混合制成250 mL细胞悬液（内含1 500 U/mL 的IL2，体积分数0.01的清蛋白），经静脉回输；1份制成1.5 mL细胞生理盐水悬液，皮下注射到肿瘤邻近的淋巴结区。上述治疗每周进行1次，共3次。疗程结束后1个月随访观察疗效。观察治疗前后血清干扰素γ（INFγ）、白介素10（IL10）和白介素12（IL12）含量变化等。

1.4 统计学方法

采用SPSS 10.0及PPMS 1.5[1]统计软件进行统计处理。

2 结 果

2.1 细胞表型检测和细胞计数

DC标志 DR和CD83的表达率分别为75%～84%和76%～85%，CIK CD3的表达率为88%～95%。每个疗程细胞总量：DC为(188.3±79.8)×106个，CIK为(58.8±22.3)×108个。

2.2 病人免疫指标观察

治疗前病人血清INFγ、IL10、IL12含量分别为（42.5±31.5）、（28.5±11.5）、（85.5±60.5）μg/L，治疗结束后1个月复查，病人上述指标分别为（65.0±45.0）、（30.1±18.1）、（89.1±71.1）μg/L，即治疗后血清中INFγ含量明显升高（t=3.679，P＜0.05），但IL10和IL12含量无显著改变（P>0.05）。

2.3 疗效及生存时间观察

12例恶性血液病病人中，7例持续完全缓解（CR），中位CR期44（32～56）个月。4例死亡，其中3例复发，1例ALL，2例非霍奇金淋巴瘤，复发后因年龄较大或未找到合适的异基因移植而死亡。1例M4病人复发，经半相合异基因造血干细胞移植（供者为其子）后病情缓解，目前持续完全缓解24个月。 .

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2.4 DCCIK细胞输注的副作用

12例病人共输注DCCIK细胞36次，有2例病人在输注DCCIK细胞后24 h内出现发热（最高体温38.5～39.5 ℃）、畏寒，应用消炎痛栓肛纳后2 h内体温恢复正常，无明显感染征象，无明显骨骼、关节疼痛，无明显白细胞、红细胞及血小板波动，无注射部位红肿热痛及静脉血管损伤。

3 讨 论

由于缺乏人类白细胞抗原（HLA）配型相合的供者，或者其他原因导致病人无条件进行异基因造血干细胞移植，自体造血干细胞移植支持下的大剂量化疗成为治疗恶性血液病的重要手段之一。临床研究发现，恶性血液病病人自体移植后约30%～40%出现病情复发[23]。因此，恶性血液病自体造血干细胞移植后如何预防肿瘤复发一直是近几年移植界所重点关注的问题之一。10年前大部分病人自体移植后进行半年左右的小剂量及中等剂量化疗，结果非但没能减少复发，反而增加了化疗后的感染率，化疗相关死亡率增加。原因可能是化疗药物通过作用于细胞分裂周期的不同环节，使细胞复制发生错误，而导致细胞死亡。因此，在理论上化疗只对处于繁殖期的细胞有杀伤作用，但对处于稳定期的肿瘤细胞疗效较差。5年前推崇的体内外造血干细胞净化疗法虽然理论上能够减少肿瘤细胞的污染，但因为能够导致移植后自体干细胞植活缓慢，增加了移植相关死亡，再者净化方法需要耗费巨大的财力，所以这种方法目前没有得到临床的广泛应用推广。近3年来，一些移植中心采用IL2静脉或皮下注射来预防复发，陈幸华等[4]应用大剂量化疗、自体造血干细胞移植、生物序贯疗法治疗非霍奇金淋巴瘤，结果移植前CR组复发率12.2%，部分缓解组复发率达到42.3%。提示自体移植后应用IL2可以降低CR病人的复发。我中心之前也曾经对4例白血病及淋巴瘤病人自体移植后注射IL2（28 d共3个疗程），其中2例死于复发，2例CR存活至今。

细胞因子诱导的CIK 是一种高效、新型免疫活性细胞，CIK 用于治疗恶性肿瘤已经成为过继免疫治疗的重要手段之一。DC是目前发现的功能最强的抗原提呈细胞，它通过处理、呈递抗原而介导机体免疫应答。但是许多恶性肿瘤尤其是白血病、淋巴瘤等恶性血液病病人体内缺乏功能性DC，不能诱发抗原特异性T 细胞应答。自体移植时应用大剂量放化疗又加重了病人的免疫缺陷，使得免疫监控细胞功能丧失。所以，在体外诱导功能性DC 用于主动免疫治疗具有重要的临床应用价值。我们先分别培养DC与CIK，然后再将二者共同培养，使DC诱导CIK特异性应答，结果显示在共培养的过程中， CIK 中CD3+CD8+、CD3+CD56+的比例较单纯CIK 有不同程度的增高，说明大量成熟DC 进一步促进了CIK细胞的成熟，与国内外研究的结果一致。我们分析DCCIK抗恶性血液病的可能机制为：在体内受某些淋巴因子作用后，CIK细胞大量释放具有细胞毒性的胞浆颗粒到胞外，这些颗粒直接破坏瘤细胞，导致CIK细胞对肿瘤细胞的直接杀伤作用。我们的研究还显示，DCCIK细胞治疗后病人体内的INFγ水平明显升高，提示活化的DCCIK可以分泌多种细胞因子如INFγ、TNFα和IL2等，不仅对肿瘤细胞有直接抑制作用，而且还可以通过调节免疫系统间接杀伤白血病细胞。应用CIK细胞治疗后实体瘤病人CD3+细胞亚群比例显著升高，外周血中免疫活性细胞比例也明显升高，提示CIK细胞在体内外能明显抑制肿瘤生长，有效改善免疫功能。

自体DCCIK细胞是应用自体的外周血单个核细胞，在体外经细胞因子诱导产生的免疫杀伤细胞，静脉及皮下注射安全性好，无需进行抗排斥治疗，临床应用简便有效，病人的痛苦小。本研究中12例病人先后应用DCCIK细胞治疗36次，除了少见的发热外，未发现明显的血液学和非血液学毒副作用，证实了该疗法的安全性。

自体造血干细胞移植是在自体造血干细胞支持下，进行致死性的超大剂量化疗。目的是为了尽可能地杀灭体内的恶性肿瘤细胞，降低复发率，取得长期生存。在自体造血干细胞移植后应用DCCIK细胞，又能够通过免疫调节杀伤活力大大降低残留的甚至是髓性的肿瘤细胞。二者结合，在本实验中取得了较好的效果。我们还将继续扩大样本数量，改进二者序贯应用的方法和时机。总之，DCCIK细胞在自体造血干细胞移植后的应用可能有助于调节免疫功能，清除微小残留病，减少复发，进一步提高恶性血液病自体造血干细胞移植的疗效。而且该疗法安全、副作用小，值得临床推广试用。

【参考文献】

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[2]冀冰心，苏力，刘聪艳，等. 自体造血干细胞移植治疗恶性血液病疗效分析[J]. 首都医科大学学报， 2008，29(2)：142145.

造血干细胞范文第5篇

【关键词】 脐血 cd34+造血干/祖细胞 smartpcr 高密度点阵膜

gene expression analysis of primary human cd34+ hematopoietic stem and progenitor cells from umbilical cord blood

li qunliang, cai haibo, liu qiwei, tan wensong.

the state key laboratory of bioreactor engineering, east china university of science and technology, shanghai 200237, china

［abstract］ objective:to better understand biological activities of cd34+ hematopoietic stem and progenitor cells(hspcs) derived from umbilical cord blood(ucb).methods:cd34+ hspcs were collected from fresh ucb by minimacs seperation. smartpcr technology was employed to amplify cdna from isolated rna. hybridization experiments were performed to determine gene expression pattern of cd34+ hspcs using atlas cdna expression array covering 588 genes.results:the data from gene expression analysis revealed that 63 genes were significantly expressed in cd34+ hspcs, and 18 genes were expressed at high levels. these expressed genes involved mainly in proliferation, differentiation, stress responses, apoptosis, transcription regulation, and cell cycle.conclusion:this study gives some new insights into genetic program of hspcs, and it may be helpful to understand biological properties and improve manipulation of hematopoietic cells.

［key words］ umbilical cord blood；cd34+ hematopoietic stem and progenitor cells；smartpcr；cdna array

造血干细胞具有自我更新和分化成所有血细胞的潜能，对维持造血功能的动态平衡起着至关重要的作用。鉴定造血干/祖细胞的基因表达图谱对认识造血发育和调控具有重要的意义，为改善其临床应用以及指导体外培养提供理论基础。因此研究cd34+造血干/祖细胞的基因表达图谱成了人们探索的热点。可能是由于脐血干细胞数量少的缘故，致使目前只有极少的相关报道。mao等［1］通过大量收集脐血和pcr方法将cd34+造血干/祖细胞表达的基因反转录成cdna克隆到λzapⅱ载体中进行测序，所得到的ests(expressed sequence tags)与公共基因库对比分析，发现855个已知基因表达。这些基因主要涉及造血、细胞分裂、细胞信号、细胞结构、细胞防御反应、基因表达以及代谢等，为造血干细胞或其他干细胞系统的基因表达分析提供了借鉴作用。在此，本实验采用smartpcr技术结合高密度点阵膜分析策略对脐血cd34+造血干/祖细胞的基因表达进行了研究，所得结果对造血干细胞生物学特性的理解具有启示作用。

1 材料与方法

1.1 cd34+造血干/祖细胞的分离纯化 采用minimacs免疫磁性吸附柱分离装置和cd34+造血干/祖细胞富集试剂盒（milienyi biotech公司），按说明进行cd34+造血干/祖细胞的分离纯化。为了提高cd34+造血干/祖细胞的纯度，将第一遍收获的cd34+造血干/祖细胞再用一根新的minimacs吸附柱进行第二轮分离纯化，经过两轮分离富集得到的cd34+造血干/祖细胞纯度高达95%以上。

1.2 总rna提取 用trizol（invitrogen）试剂提取从少量cd34+造血干/祖细胞中提取总rna，采用rq1 rnasefree dnase（promega公司）去除rna样品中混杂的少量dna，所得样品可直接进行反转录或添加rnase抑制剂于-70℃保存。

1.3 smartpcr扩增cdna 由于rna样品极少，因此采用smartpcr技术扩增生成足够量的cdna用于高密度点阵膜分析。首先，利用smart技术，以rna样品为模板，在反转录酶的作用下合成单链cdna；再经适当pcr循环数扩增后合成足量的双链cdna。smartpcr反应产物经过纯化后检测其含量，便可用于标记杂交探针。

1.4 探针制备 取500 ng左右的cdna在klenow酶 （takara公司）的作用下，利用α32p datp和clontech公司杂交试剂盒提供的高密度点阵膜特异引物（而不是随机引物）合成杂交探针，特异引物的使用能提高杂交的灵敏度和特异性。探针经nucleospin柱子纯化后，检测其放射性强度。

1.5 cdna array分析 实验所使用的cdna array购自clontech公司，产品号为77401，含588个基因。首先进行预杂交，然后将纯化的探针加入杂交管中杂交过夜，洗膜后压磷屏显影。扫描磷屏，将所得原始数据以excel表格的形式输出以作进一步分析研究。基因表达强度在背景3倍以上的视为显著表达，10倍以上则为强表达［2，3］。

2 结果

2.1 脐血cd34+造血干/祖细胞基因表达图谱 本实验使用的高密度点阵膜所含基因涉及细胞重要的生理功能。从单份脐血中获得4.55×104个cd34+造血干/祖细胞，抽提总rna，采用smartpcr技术经过21个循环之后扩增得到足够量的cdna用于高密度点阵膜分析，基因表达图谱见图1。该点阵膜被分为6个功能基因区域，用a、b、c、d、e和f表示，每一区域由14行7列，即98个基因组成，每个基因由两个点对应。高密度点阵膜的最下方一行为对照点，由空白点、阴性对照和阳性对照组成。实验表明smartpcr技术能从少量的细胞中扩增cdna用于高密度点阵膜分析，是探索干细胞分子生物学的一种有效工具。

2.2 脐血cd34+造血干/祖细胞表达的基因 实验结果表明在所检测的588个基因中，63个基因在脐血cd34+造血干/祖细胞中显著表达，18个基因强表达。这些表达的基因主要涉及细胞受体、细胞信号、应激响应、胞内信号转导、转录调节、细胞周期、癌基因和肿瘤抑制因子以及细胞凋亡等，见表1。 细胞受体包括细胞因子受体（ifngr2和il2rα）、神经细胞特有的表面受体（nmbr和epha1）以及造血细胞归巢相关的细胞表面分子（cd11a和flt1）等，其中il2rα、epha1和cd11a强表达。与细胞信号相关的基因主要编码细胞因子、生长因子以及趋化因子，它们是il10、mcsf、il1β、dbi、calgranulin a、tmsb10、tdgf3、pdgfα、tgfβ1、ccl3、ccl4以及ccl5等，而calgranulin a、tmsb10、ccl3和ccl5表达水平高出背景10倍以上。应激响应相关的基因包括抗氧化（gpx1、prdx1、gst1、prdx2、sod1以及gstm1）、耐热（hsp25和hsp90）以及dna损伤修复（ercc1，mlh1）等，gst1、hsp25、hsp90和mlh1高表达。与细胞凋亡有关的基因编码产物是caspase蛋白，包括caspase3、caspase8和caspase10等，其中caspase8强表达。 4个细胞周期相关基因是p16、p21、cyclinb1和foxo1a，其中p16、p21和foxo1a抑制细胞分裂，而cyclinb1却有促进细胞分裂的作用。另外还包括8个胞内信号转导蛋白基因、15个转录调节基因以及3个癌基因和肿瘤抑制因子基因等。

图1 脐血cd34+造血干/祖细胞基因表达图谱（略）

fig.1 gene expression pattern of primary cd34+ hspcs from ucb

3 讨论

通过基因表达分析发现63个基因显著表达，这些表达的基因与mao等研究的结果相似，主要涉及造血调节、细胞信号、细胞周期、转录调节以及细胞抵抗协迫环境等，进一步证实了本实验结果的正确性, 有助于加深对造血干细胞生物学性质的理解。

在表达的细胞受体中除了造血细胞归巢相关的细胞表面分子（cd11a和flt1）外，还包括神经细胞特有受体（nmbr和epha1）等。脐血干/祖细胞表达神经细胞受体说明在造血的早期阶段存在神经细胞和造血细胞发育的作用机制共同调节造血细胞生长的可能性，并且从分子水平支持了体外培养的造血干细胞能向神经细胞分化的观点［4］。整合素分子cd11a是组成白细胞功能抗原（lfa1）的一个亚基，lfa1与细胞间黏附分子（icam1）相互作用对造血干细胞归巢起着重要作用［5］。细胞受体flt1已被证实表达在骨髓cd34+造血干/祖细胞表面，参与造血细胞的迁移，对造血干细胞归巢具有招募作用；还可作为酪氨酸激酶受体，调节造血干细胞的增殖与分化［6］。在此，我们也发现该受体表达在脐血cd34+造血干/祖细胞表面，进一步表明了flt1分子对造血干/祖细胞生物学活性调节的普遍性。因此，系统而全面地检测造血干细胞表达的黏附分子并鉴定其在迁移和归巢过程中所起的作用有助于认识造血干细胞归巢特性的分子基础。

表1 脐血cd34+造血干/祖细胞表达的基因（略）

tab.1 genes expressed in primary cd34+ hspcs from ucb

note:1) the genes with expression levels of more than 10 folds over background are indicated by symbol.

另外，cd34+造血干/祖细胞表达许多与其增殖和分化调节相关的细胞因子、生长因子、趋化因子及其受体等，这表明在体内造血干细胞的生长行为除了受到来自基质细胞和分化成熟细胞以旁分泌方式所产生的细胞因子等的刺激作用外，还可能存在造血干细胞自分泌的调节方式。janowskawieczorek等［7］指出越来越多的证据表明自分泌和旁分泌机制协同作用控制细胞因子等的表达和分泌，进而有效地调节造血过程的动态平衡。理解正常和病理状态下造血干细胞增殖和分化的调控因素（包括细胞因子等）将对白血病的治疗以及开发更加有效的造血干/祖细胞扩增策略提供借鉴。

值得注意的是，脐血cd34+造血干/祖细胞表达多个与应激响应相关的基因，提示造血干/祖细胞很可能具有较强的抵抗不利生长环境的特性，这与最近的研究报道相一致。ramalhosantos等［8］通过比较胚胎干细胞、神经干细胞以及造血干细胞的基因表达图谱，发现216个基因共同表达在这三类干细胞系统中，这些表达基因可能代表了干细胞的属性（stemness）。进一步分析表明许多基因涉及到干细胞的应激响应，表现在dna损伤修复、蛋白质折叠、泛素系统以及脱毒机制等。这种独特的应激响应机制可能赋予了干细胞较强的环境适应能力。

总之，造血干/祖细胞的基因表达分析有助于理解造血干细胞的生物学特性，为造血干细胞的临床应用以及体外培养操作提供科学依据。

【参考文献】

1 mao m, fu g, wu j s et al. identification of genes expressed in human cd34+ hematopoietic stem/progenitor cells by expressed sequence tags and efficient fulllength cdna cloning ［j］. proc natl acad sci usa, 1998;95（14）:81758180.

2 terskikh a v, miyamoto t, chang c et al. gene expression analysis of purified hematopoietic stem cells and committed progenitors ［j］. blood,2003;102（2）:94101.

3 lu s j, li f, vida l et al. cd34+cd38- hematopoietic precursors derived from human embryonic stem cells exhibit an embryonic gene expression pattern ［j］. blood, 2004; 103（11）:41344141.

4 steidl u, bork s, schaub s et al. primary human cd34+ hematopoietic stem and progenitor cells express functionally active receptors of neuromediators ［j］. blood, 2004;104（1）:8188.

5 berrios v m, dooner g j, nowakowski g et al. the molecular basis for the cytokineinduced defect in homing and engraftment of hematopoietic stem cells ［j］. exp hematol, 2001;29（11）:13261335.

6 hattori k, heissig b, wu y et al. placental growth factor reconstitutes hematopoiesis by recruiting vegfr1(+) stem cells from bonemarrow microenvironment ［j］. nat med, 2002;8（8）:841849.

以上就是360范文网的小编对造血干细胞(精选5篇)以及造血干细胞(精选5篇)的详细介绍与分解，相信大家看完之后都已经对这方面有了更详细的认识与了解。（本文共字）

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